客戶服務熱線
400-0470-600

訂購需知

郵箱:[email protected]

電話:400-0470-600

傳真:0451-58864810

郵箱:訂單下載

qq:876341716

T7 RNA 聚合酶

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
A3601A T7 RNA Polymerase 5KU 400
A3601B 25KU 1,500
A3603A T7 耐熱RNA Polymerase 2.0 5KU 650
A3603B 25KU 2,800
A3604

T7 耐熱RNA Polymerase 2.0(高濃度)

50KU 5,600
D0604A T7 耐熱高產RNA 合成試劑盒 10T 600
D0604B 50T 2,500
T7 RNA 聚合酶對T7噬菌體啟動子具有高度的特異性,并可以其作為啟動子,DNA作為模板體外合成正義鏈或反義鏈RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA 聚合酶的底物模板,因此線性質粒、PCR產物均可用作體外合成RNA的模板。 正義或反義RNA鏈取決于模板DNA序列與T7啟動子的位置,DNA位于T7啟動子的下游,T7 RNA聚合酶會轉錄出正義RNA,反之則為反義RNA鏈。

新海基因提供兩種T7 RNA 聚合酶:野生型(A3601)和耐熱型(A3603/A3604)。野生型T7 RNA 聚合酶可在37℃對模板進行高效體外轉錄,與野生型噬菌體 T7 RNA 聚合酶相比,T7耐熱RNA聚合酶可在更高的溫度下進行體外轉錄。它可在37-52℃條件下進行高效的體外轉錄,最佳溫度為37℃,50℃反應條件下仍然保留50%以上的活性,而野生型在此溫度下無活性。基于此耐熱的體外轉錄反應特性具有以下優勢:(1)提升了GC含量較高RNA的轉錄效率;(2)提升了長片段RNA的合成能力;(3)在使用帽類似物時,提高了共轉錄的加帽效率;(4)減少了 dsRNA 副產物的形成,降低了合成 RNA 的免疫原性; (5)提升NASBA和CRISPR核酸擴增檢測性能。該系列酶均來自重組 E.coli BL21菌株純化而得,無核酸酶污染。

T7耐熱高產RNA合成試劑盒是基于T7 耐熱RNA聚合酶而組建的試劑盒,產量超過 MegaScript T7 Transcription kit,可在體外高效合成多種類型的 RNA,如mRNA、lncRNA、shRNA等。利用T7 RNA 聚合酶2.0識別T7 promoter(TAATACGACTCA CTATA G G)以倒數第二個G堿基為起點開始轉錄,該試劑盒可以將少量樣本進行高效轉錄,單次反應可獲得高達150 μg 的產物,轉錄長度可達5000nt以上。利用該試劑盒得到的 RNA 適用于多種下游應用,如RNA結構和功能研究、核酸酶生物化學研究、RNase保護分析探針、印跡雜交、反義 RNA 及 RNAi 實驗、微陣列分析、顯微注射、體外翻譯和 RNA 疫苗等。

應用

  • 制備放射標記的 RNA 探針
  • 合成用于體外翻譯的 RNA
  • 合成用于結構、加工和催化性能研究的 RNA
  • 合成 RNA 反義鏈,調控基因表達
  • 1X T7 Transcription Buffer

    40 mM Tris (pH 7.8), 20 mM NaCl, 18mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 。

    酶儲存液

    10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100 , pH 7.5。

    儲存

    -20°C可保存2年,避免反復凍融。

    熱失活

    75°C,10min。

    注意事項

    1. 轉錄DNA模板的種類:推薦使用含T7啟動子的線性化質粒和PCR產物作為模板。
    2. 轉錄模板的純度會顯著影響體外轉錄反應。在質粒DNA抽提過程中殘留的RnaseA會顯著影響轉錄RNA的質量。通過酚-氯仿抽提的質粒DNA為最佳模板。
    3. 該酶對高濃度NaCl或KCl不耐受,當其濃度高于 150mM時,其活性受到顯著抑制(~50%)。
    4. 在20μl反應體系中加入0.02U熱穩定無機焦磷酸酶可顯著提高轉錄產量(提高25~50%)。

    實例

    1.野生型和耐熱型T7 RNA聚合酶的耐熱性能比較
    以20ng DNA作為模板,分別在反應體系(20 μl)中加入100U的T7 RNA聚合酶和T7 耐熱RNA聚合酶2.0進行體外轉錄,結果可見T7 耐熱RNA聚合酶2.0在50°C仍具有較高活性,而野生型T7 RNA聚合酶在該溫度下沒有活性。
    T7耐熱RNA聚合酶
    2.熱穩定無機焦磷酸酶對轉錄產量的影響
    在反應體系(20 μl)中加入0.02U的熱穩定無機焦磷酸酶(貨號C5007)可顯著提高轉錄產物的產量。
    T7耐熱RNA聚合酶
    3.以不同大小的線性化質粒作為模板,應用T7耐熱RNA聚合酶2.0進行轉錄性能測試
    由結果可見:T7耐熱RNA聚合酶2.0在50°C條件下仍具有理想的轉錄活性。
    T7耐熱RNA聚合酶
    4.以不同大小的PCR產物作為模板,應用T7耐熱RNA聚合酶2.0進行轉錄性能測試
    由結果可見:T7耐熱RNA聚合酶2.0可有效轉錄>5000nt的RNA分子。
    T7耐熱RNA聚合酶
     
    哪个炒股平台好